液相色譜水相中常用的改性劑，你了解多少？

更新時間：2023-06-30 點擊次數：2735

在反相色譜中，流動相的選擇原則是：

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非極性/中性化合物分析一般用有機溶劑和水。極性（特別是離子型）化合物分析時，通常需要在水中加入酸/堿或者緩沖鹽來調整流動相pH值以獲得對稱的峰形和合理的保留時間。

向流動相中加入改性劑主要有以下兩種方式：

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01 氫離子抑制法

● 對于弱酸（3≤pk_a≤7）/弱堿（7≤pk_a≤8）組分，一般通過調節流動相的pH來抑制目標化合物的解離，以達到分離目的。弱酸的反相色譜保留值隨流動相pH值的減小而增大，當pH值遠小于弱酸的pk_a值（pH＜pk_a-2）時，弱酸99%以上以分子形式存在，有利于在反相色譜柱上保留。

● 對于弱堿，情況相反（須pH＞pk_a+2）。因此分析弱酸樣品時，通常在流動相中加入少量酸性緩沖液，如三氟yi酸等（實例見圖1）；分析弱堿樣品時，則加入少量堿性緩沖液，如三乙胺等。

● 下表列出幾種常見緩沖鹽的pH值可用范圍。一般緩沖鹽濃度在5-50mmol/L范圍就夠用，濃度高的緩沖鹽（＞50mmol/L）雖然緩沖能力增強，但可能在與高比例有機相混合時析出，對液相色譜輸液泵等產生不利影響。

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1-草酸；2-酒石酸；3-奎寧酸；4-甲酸；

5-丙酮酸；6-蘋果酸；7-抗壞血酸；8-乳酸；

9-乙酸；10-馬來酸；11-檸檬酸；12-富馬酸；

13-順烏頭酸；14-丙烯酸；15-丙酸；16-檸康酸

02 離子對色譜法

● 對于強酸/堿及其他離子型化合物，需要在水中加入相應的“對/反離子"，使其與待測組分離子結合生成弱極性的離子對化合物（中性締合物），以增加其在反相色譜柱（如C₁₈、C₈）上的保留，從而改善分離效果。

● 離子對試劑一般可分為酸性和堿性兩大類：

1）分析堿性物質常用的離子對試劑為烷基磺酸鹽（實例見圖2），如己烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉、十二烷基磺酸鈉等。

2）分離多羧基、磺酸基等酸性物質常用四丁基季銨鹽，如四丁基溴化銨、四丁基氯化銨等。被測組分保留時間與離子對性質、濃度、流動相組成及其pH值等都有關。

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