計算公式：

對待分離物的分離度還可以表示成如下的關系式：

接下來我們嘗試調節這三個因素，來達到最佳的色譜分離效果。

如何提高分離因子呢？在確保樣品性質不變的情況下，主要有以下兩個方面需要考慮：

01 固定相的選擇

通常情況下，固定相材料應該與樣品成分相互作用，以實現有效的分離。對于一般的疏水性樣品我們可以選擇反相色譜固定相，親水性樣品可以選擇正相色譜固定相，生物大分子可選離子交換色譜固定相，碳水化合物可用疏水作用色譜固定相，無機離子最好使用離子色譜固定相，合成聚合物最好采用凝膠色譜固定相。

02 流動相的選擇

流動相的選擇首先根據固定相的類型進行選擇，在正相色譜中，通常正己烷與異丙醇的混合物是最基本的溶劑系統，調節二者的比例可以改變溶劑系統的極性。如果基本溶劑系統不能滿足分離的需要，則可以在基本溶劑系統中再添加其他溶劑，如甲基叔丁基醚、二氯甲烷、乙腈中的一種，或是它們的混合物等，以改變它們的選擇性。如果是反相色譜則應該使用水+有機溶劑的系統，常用的有機溶劑是甲醇、乙腈以及四氫呋喃，調節它們與水之間的比例可以改變溶劑的極性。

在制備液相中，除了盡量讓兩個色譜峰之間具有更大距離外，還需盡量避免峰寬過度分布過寬，以保障柱效。影響柱效的主要因素包括以下幾個方面：

1. 樣品

為了提高制備目標物的效率，通常在進行液相進樣時會適當過載樣品。然而，如果樣品過度過載，則會導致柱效降低，分離能力下降。另外，樣品的化學性質、濃度大小、純度、樣品在兩相中的分配比等對柱效都有影響。

2. 固定相

固定相的影響主要包括固定相的填料粒徑、分布范圍、填料的形狀、表面的化學性質、表面積的大小、填料是否填充均勻、是否填充緊密、色譜柱尺寸等因素。

3. 柱長及內徑

短柱（15-100mm）：運行時間短、柱壓低，常用于高通量分析和產量較多的分析場合。

長柱（150-250mm）：分辨率高、運行時間長，適用于一些研究性的分析場合。

4. 流動相

流動相的影響因素主要包括流動相的組成、化學性質、粘度、擴散性以及線速度等。

5. 流速

流速過快會對色譜分離產生不良影響，因為快速流動的溶液容易沖刷填料表面上的化學物質。當流速較低時，物質在填料表面上的停留時間增加，可能導致物質中的雜質混入最終產物中。

6. 溫度的影響

增加溫度可以減小溶劑的粘度、增大樣品的溶解度。

容量因子：是指分離柱中目標分子在流動相和固定相之間定量分配的比例。容量因子的適當增加可以改善分離的效果，由下圖可見，當容量因子達到一定數值后，其對分離度的影響并不是很大。容量因子的增大會消耗大量的時間和溶劑，因此我們應該避免過大增加容量因子的數值。除非待收集物是非常有價值的物質，否則建議不要采用增加容量因子的方法。